rTEV蛋白酶試劑

rTEV蛋白酶試劑重組型）是經(jīng)過基因工程改造后的重組蛋白酶，它可特異性識別Glu-Asn- Leu-Tyr -Phe-Gln-Gly七氨基酸序列，

并高特異性、高活性剪切(剪切位點在Gln-Gly之間)。TEV蛋白酶經(jīng)6XHis標簽純化而得(含組胺酸標簽)，純度達99％，

剪切反應完畢后可通過Ni-NTA Resin(Cat.No.: C0401, HaiGene)去除。TEV酶在4℃-30℃溫度、pH范圍（6.0-8.5）

反應條件下均具有活性(見下表)。

不同溫度下剪切活性(%)

 4℃16℃21℃30℃

0.5 h34585670

1 h58807890

2 h71999999

3 h84999999

組分

組分名稱數(shù)量

rTEV Protease (10 U/μl)100 μl

20XrTEV Buffer1 ml

0.1M DTT100 μl

單位定義

在1XrTEV Buffer（50 mM，pH8.0, 0.5 mM EDTA, 1mM DTT），30℃反應1h，剪切>85％的3 μg底物所需要的酶量定義為一個活性單位。

應用

融合蛋白標簽剪切去除。

儲存

長期儲存-70℃，可儲存2年，-20℃可儲存6個月。

rTEV蛋白酶試劑恒溫擴增使用策略及實例展示

應用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果，可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。

應用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應結束后，倒置反應管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。

應用實例3：A3825-01 紅黃變色反應（肉眼觀察）

以 體外轉錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起

始前，下圖為 65 度反應 30min 后。

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