RnaseH試劑

RnaseH試劑是一種核糖核酸內(nèi)切酶，它能夠特異性地降解雜交到DNA鏈上的RNA磷酸二酯鍵，故能降解RNA/DNA雜交鏈中的RNA鏈。該酶不能消化單鏈或雙鏈DNA。該RNase H酶廣泛用于除去雜交到poly(dT)上的 mRNA poly(A)或除去cDNA第二鏈合成時mRNA。

單位定義

1單位指50μl反應(yīng)體系中，37℃條件下，20min內(nèi)從40pmol 長度為25bp的RNA-DNA雜交鏈中水解出1nmol核酸底物所需的酶量。

儲存

置于-20°C，可保存3年。

使用注意事項

（1）1×Rnase H Buffer：75mM KCl，50mM Tris-HCl pH 8.3，5mM MgCl2，10mM DTT。

（2）該酶的最佳反應(yīng)溫度為37°C，65°C 20min使該酶失活。

RnaseH試劑恒溫擴增使用策略及實例展示

應(yīng)用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺期)。

應(yīng)用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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