南極熱敏UDG高濃度試劑

南極熱敏UDG高濃度試劑是來源于嗜冷海洋細菌經大腸桿菌表達純化的的重組蛋白，又稱南極熱敏UDG。該熱敏UDG酶能有效地水解單鏈或雙鏈 DNA 上的尿嘧，產生的缺嘧啶位點，在高溫或高 pH 下，極易水解斷裂。該熱敏UDG酶對RNA無活性，主要用于PCR擴增產物的防污染。大腸桿菌來源的尿嘧-DNA 糖基化酶較為耐熱，經95℃10min處理仍會殘留有少量的尿嘧-DNA 糖基化酶活性，導致含有dU堿基的PCR產物的降解。而來源于嗜冷海洋細菌的熱敏UDG在50℃ 5min即失活，在進行PCR擴增前，在PCR混合液中添加尿嘧-DNA 糖基化酶（熱敏性），25℃ 2min即可消除PCR產物的殘留污染，由于尿嘧-DNA 糖基化酶（熱敏性）在PCR循環的94℃變性一步便可被滅活，因此不會影響新的含dU的PCR產物。

應用

去除單鏈或雙鏈DNA中的尿嘧堿基

去除 PCR 殘存污染

活性定義

在標準反應體系下，37°C每分鐘催化60 pmol 尿嘧從含尿嘧的雙鏈DNA上釋放所需要的酶量為一個活性單位。

反應buffer

ThermoLabile Uracil DNA Glycosylase (UDG)與絕大多數的PCR 聚合酶反應緩沖液都是兼容的，但在高離子濃度(>100mM)下活性會受到抑制。

酶保存液

20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, , 50% Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100, pH 7.5。

儲存

-20℃可保存2年。

熱失活

50℃，5min。

南極熱敏UDG高濃度試劑恒溫擴增使用策略及實例展示

應用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果，可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。

應用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應結束后，倒置反應管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現出醒目的綠色，陰性表現出橙色，區分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。

應用實例3：A3825-01 紅黃變色反應（肉眼觀察）

以 體外轉錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起

始前，下圖為 65 度反應 30min 后。

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