南極熱敏UDG試劑

南極熱敏UDG試劑是來源于嗜冷海洋細菌經大腸桿菌表達純化的的重組蛋白，又稱南極熱敏UDG。該熱敏UDG酶能有效地水解單鏈或雙鏈 DNA 上的尿嘧，產生的缺嘧啶位點，在高溫或高 pH 下，極易水解斷裂。該熱敏UDG酶對RNA無活性，主要用于PCR擴增產物的防污染。大腸桿菌來源的尿嘧-DNA 糖基化酶較為耐熱，經95℃10min處理仍會殘留有少量的尿嘧-DNA 糖基化酶活性，導致含有dU堿基的PCR產物的降解。而來源于嗜冷海洋細菌的熱敏UDG在50℃ 5min即失活，在進行PCR擴增前，在PCR混合液中添加尿嘧-DNA 糖基化酶（熱敏性），25℃ 2min即可消除PCR產物的殘留污染，由于尿嘧-DNA 糖基化酶（熱敏性）在PCR循環的94℃變性一步便可被滅活，因此不會影響新的含dU的PCR產物。

應用

去除單鏈或雙鏈DNA中的尿嘧堿基

去除 PCR 殘存污染

活性定義

在標準反應體系下，37°C每分鐘催化60 pmol 尿嘧從含尿嘧的雙鏈DNA上釋放所需要的酶量為一個活性單位。

反應buffer

ThermoLabile Uracil DNA Glycosylase (UDG)與絕大多數的PCR 聚合酶反應緩沖液都是兼容的，但在高離子濃度(>100mM)下活性會受到抑制。

酶保存液

20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, , 50% Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100, pH 7.5。

儲存

-20℃可保存2年。

熱失活

50℃，5min。

南極熱敏UDG試劑恒溫擴增使用策略及實例展示

應用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果，可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。

應用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應結束后，倒置反應管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現出醒目的綠色，陰性表現出橙色，區分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。

應用實例3：A3825-01 紅黃變色反應（肉眼觀察）

以 體外轉錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起

始前，下圖為 65 度反應 30min 后。

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