桑葉探針法PCR鑒定試劑盒説明書

本產(chǎn)品僅供科研，不得做其它用途

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本產(chǎn)品就是根據(jù)PCR原理專門開發(fā)的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。

2. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

3. 產(chǎn)品精心優(yōu)化且特異性高，引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計，不會跟除此之外的其它微生物DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。

4. PCR mix中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。

5. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的PCR反應(yīng)。

6. 本產(chǎn)品只能用于定性實驗，不能用于定量。

7. 本產(chǎn)品只能用于科研

桑葉探針法PCR鑒定試劑盒説明書樣品的制備　

【試劑盒組成】

【儲存條件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反復(fù)凍融，有效期12個月。

【適用儀器】 ABI7500、羅氏 96/480、安捷倫、伯樂、國產(chǎn)博日、宏石等各種熒光定量 PCR 儀。

定義和原理

PCR 探針法試劑盒是基于聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）技術(shù)，結(jié)合探針來檢測特定核酸序列的工具包。其原理是在常規(guī) PCR 基礎(chǔ)上，加入了一段能與目標核酸序列特異性結(jié)合的熒光標記探針。在 PCR 擴增過程中，當探針與目標序列結(jié)合后，通過熒光信號的變化來實時監(jiān)測 PCR 產(chǎn)物的擴增情況。

主要組成成分

引物：是一小段單鏈 DNA 或 RNA，與目標核酸序列兩端互補，引導 DNA 聚合酶進行 DNA 合成，決定了 PCR 擴增的特異性和范圍。

探針：帶有熒光基團和淬滅基團，在完整狀態(tài)下，淬滅基團抑制熒光基團的熒光信號。當探針與目標序列結(jié)合并被核酸酶切割后，熒光基團和淬滅基團分離，從而產(chǎn)生熒光信號。

DNA 聚合酶：負責在引物的引導下，將脫氧核苷酸（dNTPs）逐個添加到引物的 3' 端，合成新的 DNA 鏈。

dNTPs：即脫氧核苷三磷酸，包括 dATP、dTTP、dCTP 和 dGTP，是合成 DNA 的原料。

反應(yīng)緩沖液：為 PCR 反應(yīng)提供適宜的 pH 值、離子強度等環(huán)境條件，保證 DNA 聚合酶的活性和反應(yīng)的順利進行。

常見類型

TaqMan 探針法試劑盒：TaqMan 探針是一種寡核苷酸探針，其 5' 端標記熒光報告基團，3' 端標記淬滅基團。在 PCR 擴增過程中，Taq DNA 聚合酶的 5'-3' 外切酶活性會將與目標序列結(jié)合的探針切割，使熒光報告基團和淬滅基團分離，熒光信號增強。通過檢測熒光信號的強度，可以實時監(jiān)測 PCR 產(chǎn)物的擴增情況。

分子信標探針法試劑盒：分子信標是一種具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的寡核苷酸探針，其兩端分別標記熒光報告基團和淬滅基團。在沒有目標序列存在時，分子信標呈發(fā)夾結(jié)構(gòu)，熒光報告基團和淬滅基團靠近，熒光信號被淬滅。當存在目標序列時，分子信標與目標序列雜交，發(fā)夾結(jié)構(gòu)打開，熒光報告基團和淬滅基團分離，產(chǎn)生熒光信號。

優(yōu)點

高特異性：探針與目標序列的特異性結(jié)合，大大提高了檢測的準確性，能夠有效區(qū)分相似的核酸序列。

高靈敏度：可以檢測到低拷貝數(shù)的目標核酸，適合微量樣品的檢測。

實時監(jiān)測：能夠?qū)崟r監(jiān)測 PCR 擴增過程，準確地測定起始模板的拷貝數(shù)。

操作簡便：試劑盒提供了預(yù)混好的反應(yīng)體系，減少了操作步驟和誤差。

【注意事項】

1.使用本試劑盒的實驗室，應(yīng)嚴格按照國家有關(guān)部分頒布的有關(guān)基因擴增檢驗實驗室管理規(guī)范進行管理；

2.為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理；

3.各區(qū)域物品均為專用，不得交叉使用，以免污染；檢測結(jié)束后，應(yīng)立即對工作臺清潔；

4.吸取反應(yīng)液時，應(yīng)盡量避免產(chǎn)生氣泡；上 PCR 儀前，應(yīng)注意檢查各反應(yīng)管是否蓋緊，以免液體蒸發(fā)造成結(jié)果不準確；

5.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時離心；

6.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標本準備區(qū)，并單獨存放；

7.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進行任何標記；

8.檢測過程中使用過的吸頭，應(yīng)直接打到盛有 10%次氯酸的廢物缸內(nèi)，檢測結(jié)束的PCR 反應(yīng)管，切忌開蓋，并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄；工作臺及各種實驗用品應(yīng)定期用 10%次氯酸、75%酒精或紫外燈進行消毒；

9.儀器擴增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置；不同批號試劑不能混用；并在有效期內(nèi)使用。

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