Thermostable RnaseH試劑

Thermostable  RnaseH試劑來(lái)源于極度耐熱菌Thermus thermophilus.，可在較高溫度下特異性地降解雜交到DNA鏈上的RNA磷酸二酯鍵，而DNA鏈保持完整，故能降解RNA/DNA雜交鏈中的RNA鏈。與E.coli Rnase H相比， 該熱穩(wěn)定Rnase H在25-65°C均具有活性，并且該酶在95°C加熱10min后仍保留全部活性。

由于具有高的熱穩(wěn)定性，對(duì)于需要高溫反應(yīng)條件的分子生物學(xué)應(yīng)用，熱穩(wěn)定Rnase H是一個(gè)理想的選擇。本制品是經(jīng)大腸桿菌重組表達(dá)純化而得。

單位定義

一單位指50 μl反應(yīng)體系中，50℃條件下，20min內(nèi)從40bp的 RNA-DNA雜交鏈中水解出1nmol核糖核酸底物所需的酶量。

儲(chǔ)存

置于-20°C，可保存3年。

Thermostable  RnaseH試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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