Exonuclease T （核酸外切酶T）試劑

Exonuclease T （核酸外切酶T）試劑又稱為 RNase T，是一種單鏈 RNA 或 DNA 特異性核酸酶，該核酸外切酶T需要游離的 3′ 末端，

以 3′-5′ 方向去除核苷酸。核酸外切酶T可用于將含有 3′ 突出末端的 RNA 或 DNA 生成平末端。

本產品是通過重組表達Exonuclease T 基因而得的高純度蛋白，無核酸內切酶和其他外切酶的污染。

組分

名稱數量

Exonuclease T (5 U/μl)50 μl/500 μl

10X Exonuclease T Buffer1 ml/1 mlx5

單位定義

在 100 μl 反應體系中，25℃ 條件下，30 分鐘內能從1 nmol [3H]-標記的聚胸腺嘧啶核苷催化產生 0.1 nmol 的可溶于TCA的 

DNA 所需要的酶量定義為一個活性單位。

1X Exonuclease T Buffer

50mM KAc，20mM Tris-Ac，10mM Mg(Ac)2，1mM DTT（pH 7.9）

酶保存液

10 mM Tris-HCl, 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 50% Glycerol, 200 μg/ml BSA, pH 7.5。

儲存

置于-20°C，可保存3年。

使用注意事項

核酸外切酶T對RNA 和DNA 具有不同的活性。對于 RNA，在標準反應條件下，通過凝膠電泳檢測，1單位核酸外切酶T可以消化 1.0 pmol的rA20。

Exonuclease T （核酸外切酶T）試劑恒溫擴增使用策略及實例展示

應用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果，可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。

應用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應結束后，倒置反應管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現出醒目的綠色，陰性表現出橙色，區分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。

應用實例3：A3825-01 紅黃變色反應（肉眼觀察）

以 體外轉錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起

始前，下圖為 65 度反應 30min 后。

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