6min Fast 1st cDNA Synthesis Kit試劑

6min Fast 1st cDNA Synthesis Kit試劑全新一代MLV7反轉(zhuǎn)錄酶為RNase H活性缺失型的聚合酶，并含有的快速合成功能域，其將MLV的反轉(zhuǎn)錄速度提高了3-4倍

。除此外，MLV7為耐熱型，可耐受50℃ 高溫反應(yīng)，在60℃ 條件下仍然具有30%以上活性，利于打開(kāi)RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)，從而提高

復(fù)雜RNA模板的擴(kuò)增性能。

基于MLV7開(kāi)發(fā)的，采用穩(wěn)定高效的反轉(zhuǎn)錄預(yù)混體系5×Fast RT MasterMix進(jìn)行

RNA的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，使用時(shí)只需加入模板、引物和RNase Free H2O 即可，大大簡(jiǎn)化了操作過(guò)程、提高了效率、減少了操作

過(guò)程中的人為誤差。優(yōu)化的反轉(zhuǎn)錄Buffer系統(tǒng)，可以獲得更高產(chǎn)量的cDNA，從而提高后續(xù)檢測(cè)的靈敏度。合成的第一鏈

cDNA可廣泛用于2nd Strand的合成、雜交、PCR擴(kuò)增、Real-Time PCR反應(yīng)等。

組分

組分名稱(chēng)數(shù)量

5×Fast RT MasterMix400 μl

20XOligo dT(25)&Random Primer100 μl

Rnase Free H2O1 ml×2

注：1.該制品可有效反轉(zhuǎn)錄mRNA、tRNA、LncRNA、ncRNA。

  2. 該制品不可反轉(zhuǎn)錄microRNA。

主要特征

采用全新的MLV7，整個(gè)反轉(zhuǎn)錄過(guò)程只需6min

50℃進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄的MLV反轉(zhuǎn)錄酶，能更好的轉(zhuǎn)錄含有復(fù)雜高級(jí)結(jié)構(gòu)的RNA模板

高效便捷的反轉(zhuǎn)錄預(yù)混體系

反轉(zhuǎn)錄引物為Random Primer和Oligo dT Primer預(yù)混的RT Primer Mix，可更好的合成樣品中的各種cDNA

儲(chǔ)存

請(qǐng)置于-20°C，可保存2年；避免反復(fù)凍融。

性能展示

1.時(shí)間與產(chǎn)量

以1μg Hela Total RNA作為起始反轉(zhuǎn)錄模板，分別使用6min Fast 1st cDNA Synthesis Kit 和傳統(tǒng)反轉(zhuǎn)錄試劑盒（35min），

 對(duì)TGFβ、IL-6和GAPDH 3個(gè)基因進(jìn)行qPCR檢測(cè)，結(jié)果顯示，6min Fast 1 st cDNA Synthesis Kit獲得的cDNA產(chǎn)量與傳統(tǒng)

反轉(zhuǎn)錄試劑盒相當(dāng)，無(wú)顯著差異.

儲(chǔ)存

2-8℃避光保存，可保存2年。

6min Fast 1st cDNA Synthesis Kit試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類(lèi)型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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