乙醇脫氫酶(ADH)檢測試劑盒(乙醛微板法)

乙醇脫氫酶(Alcohol dehydrogenase，ADH)的系統名為乙醇：輔酶I氧化還原酶（alcohol：NAD+ oxidoreductase），

大量存在于人和動物肝臟、植物及微生物細胞之中，是一種含鋅金屬酶，具有廣泛的底物特異性。乙醇脫氫酶夠以煙胺腺嘌呤

二核苷酸(NAD)為輔酶，催化伯醇和醛之間的可逆反應： CH3CH2OH+ NAD+→ CH3CHO +NADH+ H+。在人和哺乳動物體

內，乙醇脫氫酶與乙醛脫氫酶(ALDH)構成了乙醇脫氫酶系，參乙醇脫氫酶與體內乙醇代謝，是人和動物體內重要的代謝酶，

作為生物體內主要短鏈醇代謝的關鍵酶，它在很多生理過程中起著重要作用；丙酮酸脫羧酶(PDC)、乙醇脫氫酶(ADH)是乙醇發

酵途徑的關鍵酶，無氧呼吸途徑代謝產物的過程積累對細胞產生毒性，影響線粒體結構和三羧酸循環的相關酶活性。

乙醇脫氫酶(ADH)檢測試劑盒(乙醛微板法)檢測原理是在弱堿條件下，以乙醛為底物，乙醛在ADH催化下被NADH還原

為乙醇，ADH每催化1分子乙醛消耗1分子NADH，通過分光光度比色法(酶標儀)測定340nm處吸光度的變化，計算出NADH的

消耗速率進一步推算出乙醇脫氫酶活性水平，主要用于檢測植物樣本、血清等中乙醇脫氫酶活性。該試劑盒僅用于科研領域，

不適用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

自備材料：

1、蒸餾水

2、電子天平、研缽或勻漿器、離心管或試管

3、低溫離心機、恒溫箱或水浴鍋、酶標儀、酶標板

操作步驟(僅供參考)：

1、準備樣品∶

①植物樣品︰取1g植物組織或水果中層果肉，加入2.5ml PAL Lysis Buffer，冰浴情況下充分搗碎研磨或勻漿，4℃ 10000r/min

離心15~20min，留取上清液，-20℃凍存，用于苯丙氨解氨酶的檢測。

②血漿、血清和尿液樣品︰血漿、血清按照常規方法制備后可以直接用于該試劑盒的測定，-20℃凍存，用于苯丙解氨的檢測。

③細胞或組織樣品∶取恰當細胞或組織裂解液，如果有必要需進行適當勻漿，4℃ 10000r/min離心15~20min，取上清液，

-20℃凍存，用于苯丙酸解氨酶的檢測。④高活性樣品︰如果樣品中含有較高活性的苯丙解氨酶，可以使用蒸餾水或PAL

Lysis Buffer稀釋進行恰當的稀釋。

2、PAL加樣∶

取96孔板，按照下表設置對照孔、測定孔，溶液應按照順序依次加入，并

注意避免產生氣泡。如果樣品中的PAL活性過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定，樣品的檢測最好能設置2平行孔，

求平均值。

加入物（μl）對照孔測定孔

蒸餾水150100

待測樣本5050

PAL Assay Buffer-50

3、PAL檢測︰

以對照孔為對照(調零)，酶標儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為   A測定0);40℃準確孵育1h，立即加入10μl PAL終止

液終止反應(備選方案)，以對照孔為對照調零，酶標儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為A測定1)。

注意︰加入PAL終止液終止反應為非必須步驟，可37℃準確孵育1h后直接以對照孔為對照調零，酶標儀立即測定290nm處測定

孔的吸光度。

注意事項∶

1、待測樣品中不能含有酶抑制劑，同時需避免反復凍融。

2、獲得上清液為PAL酶液，應盡快檢測，亦可-20°℃保存。

3、如果沒有可測定紫外區的酶標儀和酶標板，也可以使用紫外分光光度計和石英比色皿，但應注意比色杯的最小檢測體積。

4、每次檢測指標不宜過多，否則操作時間不一，有可能導致樣本間的差異。5、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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