可溶性果膠(SP)檢測(cè)試劑盒(咔唑微板法)

天然果膠類物質(zhì)以原果膠、果膠(Pectin)、果膠酸的形態(tài)廣泛存在于植物的果實(shí)、根、莖、葉中，是細(xì)胞壁的一種組成成分，

它們伴隨纖維素而存在，構(gòu)成相鄰細(xì)胞中間層粘結(jié)物，使植物組織細(xì)胞緊緊黏結(jié)在一起。原果膠是不溶于水的物質(zhì)，但可在酸

、堿、鹽等化學(xué)試劑及酶的作用下，加水分解轉(zhuǎn)變成水溶性果膠。果膠(Pectin)又稱多聚半乳糖醛酸，是由D-半乳糖醛酸以α-1,4

糖苷鍵連接形成的直鏈狀聚合物，本質(zhì)上是一種線形的多糖聚合物，含有數(shù)百至約1000個(gè)脫水半乳糖醛酸殘基，

其相應(yīng)的平均相對(duì)分子質(zhì)量為50000~150000。

可溶性果膠(SP)檢測(cè)試劑盒(咔唑微板法)檢測(cè)原理是果膠物質(zhì)水解生成半乳糖醛酸，后者在硫酸溶液中與咔唑進(jìn)行縮合

反應(yīng)形成紫紅色的化合物，該化合物呈色強(qiáng)度與半乳糖醛酸濃度成正比，該化合物顏色在反應(yīng)1~2h內(nèi)呈色最深，當(dāng)反應(yīng)液顏色

最深時(shí)在波長(zhǎng)530nm處測(cè)定吸光度，通過與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，計(jì)算出樣品中可溶性果膠含量。該試劑盒主要用于定量檢測(cè)植物組織

或果實(shí)中可溶性果膠含量，該50T試劑盒可以檢測(cè)50~60個(gè)樣品。該產(chǎn)品僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

1、取內(nèi)徑為8mm的玻璃試管2支，分別加入白陶土-腦磷脂混懸液0.2ml。

2、靜脈采血1ml，立即取下針頭，沿管壁向各試管注入血液0.5ml，立即混勻并啟動(dòng)秒表計(jì)時(shí)，并置于37℃水浴中。

3、每隔10s輕搖試管一次，觀察管內(nèi)血液流動(dòng)情況，直至血液凝固。記錄血液凝固所需時(shí)間，即為ACT。

4、取2支試管血液凝固時(shí)間的平均值作為ACT 值。

計(jì)算：參考區(qū)間： (1.77±0.76)min

4、配制標(biāo)準(zhǔn)品工作液︰如果檢測(cè)血清、尿液等樣品，按取丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml):蒸餾水=1：99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml，如果檢測(cè)組織樣品按丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml。

注意事項(xiàng):

1、實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)盡量新鮮，如取材后不立即使用，應(yīng)存于-20°C.

2、實(shí)驗(yàn)用蒸餾水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水，并蓋緊口。

3、TA滴定液為堿性溶液，有腐蝕性，請(qǐng)小心操作。

4、TA標(biāo)定液容易長(zhǎng)菌，宜4℃保存，一旦發(fā)現(xiàn)有絮狀物請(qǐng)棄用。

5、果實(shí)中含酸量較少時(shí)可將TA滴定液適當(dāng)稀釋后使用，可考慮用0.01~0.05M  TA滴定液進(jìn)行滴定。

6、TA滴定液含量計(jì)算公式中，V0最好為3次空白測(cè)定的平均值。

7、如果所測(cè)樣品的濃度過高，應(yīng)用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測(cè)定，并將稀釋倍數(shù)帶入公式。

8、如果樣品顏色較深，滴定終點(diǎn)不易觀察，應(yīng)采用電位滴定法。

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