慢病毒載體應(yīng)用

慢病毒載體應(yīng)用

1 體外感染細(xì)胞

慢病毒載體能夠有效地感染培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞、肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞、神經(jīng)元、內(nèi)皮細(xì)胞、干細(xì)胞等多種類型原代細(xì)胞和大部分細(xì)胞系。慢病毒的感染具有整合特性，能夠?qū)⑼庠椿蛴行У卣系剿拗魅旧w上，因而可以達(dá)到持久性表達(dá)，從而構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株，用于基因的細(xì)胞功能研究。

體外使用慢病毒感染細(xì)胞需要注意，由于每種細(xì)胞對(duì)慢病毒的敏感性不同，有的容易感染，有的比較難，同時(shí)每種慢病毒載體熒光強(qiáng)度也有差異，所以正式實(shí)驗(yàn)前需要做病毒感染預(yù)實(shí)驗(yàn)來(lái)確認(rèn)MOI值以達(dá)到理想的實(shí)驗(yàn)效果。

MOI值是multiplicity of infection 的縮寫，即感染復(fù)數(shù)，其含義是感染時(shí)病毒與細(xì)胞的數(shù)量比值，一般以實(shí)驗(yàn)中某個(gè)細(xì)胞，感染達(dá)到80%，定義為這個(gè)細(xì)胞的MOI值，即病毒量與細(xì)胞數(shù)的比值；加的病毒量(μl)=細(xì)胞數(shù)×MOI/滴度(…/ml) ×1000

注意：理論上MOI值越高，慢病毒感染上的可能性越大，感染效率越高，但是這樣對(duì)細(xì)胞的毒性也越大，因此，預(yù)實(shí)驗(yàn)確認(rèn)MOI值要在細(xì)胞成活率和感染效率中找到一個(gè)平衡點(diǎn)。一般如果MOI超過100，甚至200還感染不是，說(shuō)明慢病毒非常難感染這株細(xì)胞，甚至感染不上，考慮換一種方式，如腺病毒或電轉(zhuǎn)。

2 體內(nèi)構(gòu)建成瘤模型

體內(nèi)應(yīng)用時(shí)，慢病毒可以攜帶目的基因或螢光素酶基因，篩選穩(wěn)定表達(dá)的腫瘤細(xì)胞株，直接接種構(gòu)建皮下成瘤模型，或通過原位或靜脈注射等方式構(gòu)建轉(zhuǎn)移模型，活體成像檢測(cè)用于研究體內(nèi)腫瘤的發(fā)生發(fā)展或轉(zhuǎn)移等。

慢病毒載體基礎(chǔ)知識(shí)及應(yīng)用

此外，也可以體內(nèi)定位注射慢病毒，或瘤內(nèi)注射慢病毒等。