如何避坑——復蘇細胞不貼壁

細胞為什么要貼壁？

細胞貼壁的過程使形態發生很大變化，細胞形態改變是細胞內骨架（是真核細胞中的蛋白纖維網架體系，由微管、微絲及中間纖維組成的體系）本身和細胞外基質共同作用的結果。

密度大于培養基的細胞（絕大部分細胞）會沉降在底面上，那么細胞要生存必定得改善這個環境，分泌細胞外基質，改善底面的結構，然后很自然就貼附在底面上了。

密度小于水的細胞，如脂肪細胞，漂浮在液面上，所以不可能貼在底面上，但是如果將培養液加滿，那么細胞能夠與培養瓶上面的壁接觸同樣可以貼壁。因此可以說，細胞貼壁是適應環境的一種反應。

細胞不貼壁，可能是這些原因？

細胞的傳代最重要的是胰酶處理時間：消化不夠細胞本身就是成團的；若胰酶處理太久，容易造成細胞膜蛋白損傷，使細胞貼壁不緊，顯微鏡下觀察立體感不強，嚴重的時候甚至會造成細胞死亡。

缺少貼壁因子：血清中含有促貼壁因子，而無血清培養基工藝中由于缺少這種促貼壁因子，細胞的貼壁效果會下降很多。

支原體或細菌的污染。

培養液配置、儲存不當，如 pH 值過堿，Gln 量太少等原因。

復蘇的細胞本身狀態不好，已經老化，失去貼附性。

接種細胞數目太少，無法分泌足夠的細胞外基質。

復蘇時處理速度太慢，復蘇過程不當。

復蘇后注意事項

細胞復蘇后只有非常少量細胞貼壁，是不是需要重新復蘇？先不要著急丟掉！可以補加血清和細胞因子，或者每隔 2-3 天換新鮮的生長培養基，經過 2-3 次換液后，大部分細胞就能看到明顯增殖，此時再按照正常傳代操作即可。

細胞復蘇后剛開始已經貼壁了狀態不錯，后面第二天開始出現死亡現象，這個情況可能是凍存前細胞消化過度，或者凍存中收凍存液shahai細胞凋亡導致的情況。