ATCC細(xì)胞：凍存和復(fù)蘇具體步驟解析

ATCC細(xì)胞種類繁多，涵蓋超過1000種動(dòng)物細(xì)胞系和7000種微生物菌種，涉及動(dòng)物、植物、微生物等多個(gè)領(lǐng)域，是全球科學(xué)研究的重要資源。這些細(xì)胞系經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制和驗(yàn)證，包括形態(tài)學(xué)檢查、遺傳學(xué)分析和無污染檢測(cè)，確保其可靠性和純度。例如，ATCC提供的細(xì)胞系如RAW264.7、HEK293、Vero E6等，均通過了STR分析和污染檢測(cè)，用于多種生物學(xué)研究。

ATCC細(xì)胞的凍存具體步驟：

選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的健康細(xì)胞（此時(shí)增殖活躍），用胰酶消化貼壁細(xì)胞（懸浮細(xì)胞直接收集），離心（125g×10min）棄上清

配制含保護(hù)劑的冷凍液：無血清冷凍液（如貨號(hào)C7001）

或

含10% DMSO +90% FBS/培養(yǎng)基

重懸細(xì)胞至密度為1×10?~5×10? cells/mL

分裝至標(biāo)記好的冷凍管（含細(xì)胞名稱/日期/代數(shù)），密封

程序降溫：

方法：程控冷凍儀（-1°C/min）

替代方法：

先放于-80°C冰箱24小時(shí)（用聚苯乙烯盒隔熱）

再轉(zhuǎn)入液氮?dú)庀鄬娱L(zhǎng)期保存（<-130°C）

ATCC細(xì)胞的復(fù)蘇具體步驟：

提前準(zhǔn)備：

預(yù)熱培養(yǎng)基至37°C

調(diào)節(jié)CO?培養(yǎng)箱條件（通常37°C,5% CO?）

快速解：

從液氮取出冷凍管→立即浸入37°C水浴搖晃至冰晶融化（約1~2分鐘）

去除DMSO：

轉(zhuǎn)移細(xì)胞懸液至含9mL培養(yǎng)基的離心管

離心125g×10min棄上清（去殘留DMSO）

重懸接種：

用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞→接種至培養(yǎng)瓶

后續(xù)觀察：

24小時(shí)后換液并評(píng)估貼壁/存活率

注：雜交瘤等敏感細(xì)**胞可能需要數(shù)天恢復(fù)

鍵注意事項(xiàng)：

全程無菌操作（酒精消毒冷凍管表面）

避免溫度波動(dòng)：

不可將細(xì)胞存放于-80°C超過24小時(shí)

解速必須快過臨界溫區(qū)（-5~0°C）

記錄代數(shù)/狀態(tài)：

ATTC細(xì)胞超過50代建議棄用

推薦使用10代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)