LNCaP clone FGC細胞培養攻略

人前列腺癌細胞LNCaP Clone FGC，是1977年從一位50歲白人男性（血型B+）的左鎖骨淋巴結針刺活檢中分離的，當時該患者已確診為轉移性前列腺癌。根據報道，該細胞對5-α-二氫睪酮（生長調節并生成酸性磷酸酶ACP）有響應。

01,該細胞并不形成一致的單層，而是形成集落；

02,該細胞會使培養基快速變酸，且生長緩慢，故傳代后 48 小時內不應擾動；

03,普通TC處理的培養瓶或皿不能使細胞很好的貼壁，培養難度較高，需使用 Corning 的 cellbind 細胞培養瓶（貨號是 3289），或者使用多聚-L-賴氨酸溶液（貨號 PB180523）包被過的培養皿；

04,在細胞運輸途中，多數細胞會從培養瓶底分離，大片懸浮在培養基中，按照收貨注意事項處理即可恢復正常。

收貨處理方式

收貨后，如果發現細胞漂浮或成團，可按下面的步驟進行處理：

01,將培養瓶內的所有培養基，轉入無菌離心管，離心收集細胞（1200rpm 3min）；

02,去掉上清，用PBS重懸細胞，將細胞收集到一個離心管中，PBS震動離心管混勻即可，再次離心（1200rpm 3min）；

03,去掉上清，加入1ml左右0.25%胰酶，重懸混勻細胞。震動離心管，混勻即可，不能吹打。放入培養箱，消化細胞，消化時間3分鐘左右；

04,消化完畢后，用移液槍輕輕吹打細胞懸液，使細胞團分散。加入5ml含血清的培養基，混勻后終止消化，離心（1200rpm 3min）；

05,去掉上清，加入5-7ml相應培養基混勻，輕輕/反復吹打細胞，接種于無菌T25瓶中（接種容器應提前用對應培養基浸潤）。

▲ 細胞到貨漂浮

▲ 細胞接種量少

傳代步驟

01,吸出原培養液；

02,加入2ml左右PBS，輕輕晃動培養瓶，潤洗細胞，吸出PBS，丟棄；

03,加入1ml左右胰酶，輕輕晃動培養瓶，使之浸潤所有細胞；

04,放入培養箱消化，消化5分鐘左右，顯微鏡下可看到，細胞塊中間的細胞明顯分離變圓，且自然脫落（全程不要拍打培養瓶）；

05,加入3ml含血清的培養基，終止消化，輕輕/反復吹打細胞，在顯微鏡下觀察。細胞懸液中，細胞盡量為單個狀態；

06,收集細胞懸液，離心（1200rpm 3min）。離心完，吸出上清，丟棄；

07,加入新鮮培養基，吹打幾下，混勻細胞即可。按需接種到新培養瓶，補充足量培養基，擰松瓶蓋，或使用透氣瓶蓋進行培養；

08,檢查培養箱的二氧化碳、溫度及水盤。

傳代比例和頻次

推薦1:2~1:4傳代，每4~5天傳代一次。

換液步驟

吸出舊培養基，沿培養瓶側邊加入新培養基；

每3天換液一次。

凍存步驟

01,配置凍存液。推薦配比：55%（基礎培養基1640）+40%(血清)+5%（DMSO）；

02,DMSO配置時會放熱，一定要等凍存液冷卻后再使用，避免灼傷細胞；

03,細胞消化好后用新鮮培養基中止，制成細胞懸液；

04,1200rpm 3min 離心后去上清，盡量吸干凈上清；

05,加入配置好的凍存液，重懸，建議一個T25長滿凍存1支，或者細胞計數后，按照2-5×10⁶cells/支的比例凍存；

06,將分裝好的凍存液轉入程序凍存盒，放入-80℃冰箱過夜；

07,從-80℃冰箱取出凍存管，迅速轉移到液氮，長期保存。

復蘇步驟

01,將水浴鍋預熱至37℃，準備好干凈的一次性手套，向一個無菌離心管內，加入9ml無菌培養基；

02,將細胞從液氮罐中取出，放入一次性手套中，迅速沒入水浴鍋。搖晃凍存管加速溶解，以1分鐘內全部溶解為宜；

03,在超凈臺中，將復蘇好的細胞液，加入到裝有新鮮培養基的離心管內，1200rpm/min離心3分鐘，離心完畢，去掉上清；

04,用適量與細胞對應的培養基重懸細胞，接入到無菌容器（培養瓶或培養皿）中，補充一定量培養基，放入培養箱培養；

05,溶解過程要迅速，已溶解的凍存細胞不能在常溫下存放太久，需盡快離心去除DMSO。