TMB底物顯色試劑盒(ELISA，HRP顯色)實驗操作

TMB底物顯色試劑盒(ELISA，HRP顯色)

一、產(chǎn)品簡介：

3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)是非常好的酶免試驗顯色劑，能溶解于多種有機溶劑和雙蒸水中，為穩(wěn)定的無色溶液，與適量過氧化脲或雙氧水與緩沖液混勻后與過氧化物酶作用產(chǎn)生清晰的藍色產(chǎn)物，極易觀察。由于其靈敏度高，配制后的工作液穩(wěn)定，加上無致癌特性，被廣泛用于酶聯(lián)免疫(ELISA)試驗和尿試紙的檢測反應等，TMB主要應用于酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)，經(jīng)典的方法是采用A、B液分開配制，使用前再混合的方法，并且長期存放穩(wěn)定，本試劑一般情況下為無色，有時略顯淺藍色或淺黃色。

雅吉生物的TMB底物顯色試劑盒(ELISA,HRP顯色)主要由TMB顯色液、TMBbuffer、TMB氧化劑組成，其特點是：

1、靈敏度高；

2、穩(wěn)定性好，顯色終止后讀數(shù)穩(wěn)定；

3、背景低：底物溶液在450nm檢測時OD值一般小于0.05。

該試劑僅用于科研領域，不用于臨床診斷或其他用途。

二、產(chǎn)品組成：

三、自備材料：

1、酶標儀

2、酶標板、96孔板

3、恒溫箱(備選)

4、(備選)終止液：鹽酸或硫酸等

四、操作步驟(僅供參考)：

1、用適當?shù)母蓛羧萜?/span>(用純凈水反復沖洗)，取試劑(A)、(B)、(C)，按A：B：C=5000：5000：4的比例混合，即為TMB顯色工作液，待達到室溫后即可使用。

2、加液：加完HRP結合物并溫育一定時間，洗板3～5次，每孔加TMB顯色工作液100μl，在室溫(15～25℃)或37℃下溫育10～30分鐘。

3、(選做)終止：加等體積的1M鹽酸或硫酸溶液終止反應，孔中反應液由藍色變?yōu)辄S色。

4、讀數(shù)：30min內在450nm處讀數(shù)。

五、注意事項：

1、本試劑盒給予的TMB氧化劑多于實際使用量，請按比例使用。

2、TMB氧化劑易揮發(fā)，請注意密閉保存，以免效率下降，一旦開封請盡快使用。

3、TMB氧化劑有腐蝕性，請勿直接接觸于人皮膚、毛發(fā)等。

4、如果出現(xiàn)高的反應背景或沉淀，表明TMB底物反應過于強烈。

5、終止反應不是必須步驟，如不加終止液應顯色完成后立即檢測。

6、一般市售的濃鹽酸為11.6M，濃硫酸為18.3M，但應注意其揮發(fā)性。

7、為了避免產(chǎn)生沉淀，可在終止后馬上讀數(shù)，或進一步稀釋一抗和/或HRP結合物，再次進行試驗。

8、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

六、有效期：12個月內有效。

七、運輸及保存：4℃運輸，4℃保存。