流式細(xì)胞術(shù)操作步驟指南

流式細(xì)胞術(shù)具體步驟

1、首先，制備單細(xì)胞懸液

將待測(cè)細(xì)胞或微粒制成單細(xì)胞懸液，經(jīng)特異性熒光染料標(biāo)記抗體進(jìn)行染色，在恒定氣體的壓力下進(jìn)入流動(dòng)室，不含細(xì)胞或

微粒的緩沖液在高壓下從鞘液管噴出，鞘液管入口方向與待測(cè)樣品流形成一定角度，鞘液包繞著樣品高速流動(dòng)，

組成一個(gè)圓柱形的液流束，待測(cè)細(xì)胞或微粒在鞘液的包被下單行排列，依次通過檢測(cè)區(qū)域。

2、其次，收集單細(xì)胞上的熒光信號(hào)

流式細(xì)胞儀通常以激光作為發(fā)光源，經(jīng)過聚焦整形后的光束垂直照射在樣品流上，細(xì)胞或微粒上的熒光染料被激發(fā)，

產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。光散射信號(hào)在前向小角度進(jìn)行檢測(cè)，這種信號(hào)基本上反映了細(xì)胞體積的大小；熒光信號(hào)的接受方向

與激光束垂直，經(jīng)過一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離，形成多個(gè)不同波長的熒光信號(hào)。

3、再次，統(tǒng)計(jì)結(jié)果

熒光信號(hào)的強(qiáng)度代表了所測(cè)細(xì)胞膜表面抗原強(qiáng)度或細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的濃度，經(jīng)光電轉(zhuǎn)換變?yōu)榭杀挥?jì)算機(jī)識(shí)別的數(shù)字信號(hào)。

計(jì)算機(jī)把所測(cè)量到的各種信號(hào)進(jìn)行計(jì)算機(jī)處理，將分析結(jié)果顯示在計(jì)算機(jī)上。

4、最后，做細(xì)胞分選

細(xì)胞的分選是指根據(jù)所測(cè)定的各個(gè)參數(shù)將的細(xì)胞從細(xì)胞群體中分離出來的一種方式，通過分離含有單細(xì)胞的液滴實(shí)現(xiàn)

。在流動(dòng)室的噴口上方配有一個(gè)超高頻的壓電晶體，產(chǎn)生的振動(dòng)使噴出的液流形成均勻的液滴，待測(cè)細(xì)胞就分散在這些液滴

之中。將這些液滴充以正負(fù)不同的電荷，當(dāng)液滴流經(jīng)帶有幾千伏特的偏轉(zhuǎn)板時(shí)，在高壓電場(chǎng)的作用下偏轉(zhuǎn)，落入各自的收集

容器中，不予充電的液滴落入中間的廢液容器，從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的分離。