蛋白marker的分類

蛋白marker的分類

一. 未染色（pre mixed）蛋白分子量標準

未染色的蛋白分子量標準是-簡單，也是準確的一種。由于沒有附帶染料分子或者是標記分子，所示大小正好是蛋白原本的大小，

是精-確判斷蛋白大小必須的。現在的Marker多數都選用預混和的Marker，方便不同大小的蛋白比較。預混的Marker通常有幾條帶加倍濃度

作為指示，因為混合的條帶越多，越不好記，誰知道哪條是那條！數到眼都花了。所以當看到特別濃的那幾條標志帶就記得是哪里了。

不過要記得，小帶通常都不那么容易看清楚的。在選擇上來說，當然是選擇其中至少有一條條帶和自己的目的蛋白大小相近的-好，越近越好

。如果你的蛋白不幸在兩條跨度較大Marker條帶之間，選別的Marker吧。預混的Marker使用上不如預染Marker（pre-stained）好用，

因為電泳過程中看不到，要和目標蛋白一起等到后染色才“開蠱"，無法對實驗起預示參照作用。屬于“后知后覺"型的，

當然還是比“不知不覺"不做對照的要好。

① 寬分子量蛋白標準

如果從實驗室總體考慮的，就選范圍盡量寬，條帶分布比較均勻的，這樣你的蛋白無論在哪個區間都容易判斷，避免正好落在一段空白區的

危險。不過條帶越多，每次上樣量也就越費。拿到Marker后，如果買的是大包裝，就應該考慮分裝。多次反復凍融對于蛋白的危險，

不用多說吧。另外要記得，寬譜的Marker不一定每條都能看到的，特別是Mini Cell。如果側重大蛋白，那小的可能就已經跑掉了，

不是質量不好哦。

② 高分子量蛋白標準

通常在檢測大分子量蛋白經常使用到高分子量蛋白標準，

③ 低分子量蛋白標準

在一般的蛋白電泳當中，更常用的是低蛋白標準分子量，除了有指示蛋白大小的作用以外，有時還可以用作粗略的定量。實驗室用在一般

蛋白電泳的低分子量蛋白標準中。

在低分子量蛋白標準這里還包括可特別小的蛋白標準，比如30kD以下蛋白或者多肽的分離辨別。其中GE的從2kD到16kD之間有6條帶的蛋白

標準挺不錯，另外提醒一句，特別小的蛋白Marker條帶如果要顯色好，上樣一定要上足夠的量哦。

二.預染蛋白分子量標準

預染蛋白分子量是一些純化好的蛋白混合物，通過與染料共價耦聯，在電泳過程中或者轉膜時可以直接觀察到。預染蛋白分子量的出現方便

了我們的實驗，這種蛋白分子量標準可以幫助我們在電泳時、電泳后，以及轉膜后監測電泳情況和估計遷移率——比如，已知垂直電泳-

佳分辨區域大約在膠的2/3處，如果使用預染Marker就可以預測目標蛋白進入-佳分辨區時停止電泳以得到-佳分辨效果；

如果觀察到Marker電泳異常也可以及時終止電泳；另外在Western Blot轉膜以后可以直接觀察蛋白轉膜是否，

還可以在膜上標記蛋白分子量，所以吸引了許多實驗室人員購買預染蛋白標準。值得注意的是預染蛋白Marker與染料共價耦聯，

所以在不同的緩沖條件下電泳時遷移特性可能會發生某些變化，可能導致一些偏差，所以不太適合精-確定位蛋白——不過多數情況下

Marker的條帶未必能和我們的目標蛋白一樣，我們得到的也不過是一種相對Marker指示的參考大小，后都需要Western來定性，

所以如果不是要區分大小相近的條帶，預染Marker還是很好用的，而且也可以和未染色的蛋白標準一起使用。

預染蛋白標準可以分為兩種：單色預染和多色預染，其實區別就在于幫助在實驗過程中辨認某個條帶的大小——Marker條帶越多參考價值越

大，可就越難辨認區分，如果用不同的顏色來區別就比較好辨認啦。如果沉悶的電泳實驗中跑出五顏六色的彩虹Marker，

此時心情想必會愉快一些！單色的Marker通常是利用其中某些條帶加倍濃度來提示其大小的。還有一點特別要注意，由于轉膜是一個將膠里

的Marker濃縮在潔白的膜上，所以需要的上樣量相對少一些，如果想要在電泳過程中看到美麗的“彩虹"，或者單色的Marker往往需要比

說明書里多加一些Marker的。